MIS18BP1
MIS18-vezujući protein 1 je protein koji je kod ljudi kodiran genom MIS18BP1.[5][6][7] Gen je poznat i kao LKNL2, M18BP1, C14orf106 i HSA242977.[5] MIS18A (618137), MIS18B (OIP5; 606020) i MIS18BP1 čine kompleks MIS18. MIS18 posreduje u transportu novosintetiziranog centromernog proteina A (CENPA) u centromerama. (Fujita et al., 2007).
Gross (2018) locirao je gen MIS18BP1 na hromosomskoj poziciji 14q21.2, na osnovu poravnavanja sekvence MIS18BP1 (GenBank BC051885) sa genomskom sekvencom (GRCh38).[8]
Aminokiselinska sekvenca
[uredi | uredi izvor]Dužina polipeptidnog lanca je 1.132 aminokiseline, a molekulska težina 129.085 Da.[9].
| 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| MIATPLKHSR | IYLPPEASSQ | RRNLPMDAIF | FDSIPSGTLT | PVKDLVKYQN | ||||
| SSLKLNDHKK | NQFLKMTTFN | NKNIFQSTML | TEATTSNSSL | DISAIKPNKD | ||||
| GLKNKANYES | PGKIFLRMKE | KVLRDKQEQP | SRNSSLLEPQ | KSGNNETFTP | ||||
| NRVEKKKLQH | TYLCEEKENN | KSFQSDDSSL | RASVQGVPLE | SSNNDIFLPV | ||||
| KQKIQCQQEK | KAPLHNLTYE | LPTLNQEQEN | FLAVEARNKT | LTRAQLAKQI | ||||
| FHSKESIVAT | TKSKKDTFVL | ESVDSADEQF | QNTNAETLST | NCIPIKNGSL | ||||
| LMVSDSERTT | EGTSQQKVKE | GNGKTVPGET | GLPGSMKDTC | KIVLATPRLH | ||||
| ITIPRRSKRN | ISKLSPPRIF | QTVTNGLKKN | QVVQLQEWMI | KSINNNTAIC | ||||
| VEGKLIDVTN | IYWHSNVIIE | RIEHNKLRTI | SGNVYILKGM | IDQISMKEAG | ||||
| YPNYLIRKFM | FGFPENWKEH | IDNFLEQLRA | GEKNREKTKQ | KQKTGRSVRD | ||||
| IRKSMKNDAR | ENQTDTAQRA | TTTYDFDCDN | LELKSNKHSE | SPGATELNMC | ||||
| HSNCQNKPTL | RFPDDQVNNT | IQNGGGDDLS | NQELIGKKEY | KMSSKKLKIG | ||||
| ERTNERIIKS | QKQETTEELD | VSIDILTSRE | QFFSDEERKY | MAINQKKAYI | ||||
| LVTPLKSRKV | IEQRCMRYNL | SAGTIKAVTD | FVIPECQKKS | PISKSMGTLE | ||||
| NTFEGHKSKN | KEDCDERDLL | TVNRKIKISN | LEKEQMLTSD | FKKNTRLLPK | ||||
| LKKIENQVAM | SFYKHQSSPD | LSSEESETEK | EIKRKAEVKK | TKAGNTKEAV | ||||
| VHLRKSTRNT | SNIPVILEPE | TEESENEFYI | KQKKARPSVK | ETLQKSGVRK | ||||
| EFPITEAVGS | DKTNRHPLEC | LPGLIQDKEW | NEKELQKLHC | AFASLPKHKP | ||||
| GFWSEVAAAV | GSRSPEECQR | KYMENPRGKG | SQKHVTKKKP | ANSKGQNGKR | ||||
| GDADQKQTIK | ITAKVGTLKR | KQQMREFLEQ | LPKDDHDDFF | STTPLQHQRI | ||||
| LLPSFQDSED | DDDILPNMDK | NPTTPSSVIF | PLVKTPQCQH | VSPGMLGSIN | ||||
| RNDCDKYVFR | MQKYHKSNGG | IVWGNIKKKL | VETDFSTPTP | RRKTPFNTDL | ||||
| GENSGIGKLF | TNAVESLDEE | EKDYYFSNSD | SA |
- Simboli
C: Cistein
D: Asparaginska kiselina
E: Glutaminska kiselina
F: Fenilalanin
G: Glicin
H: Histidin
I: Izoleucin
K: Lizin
L: Leucin
M: Metionin
N: Asparagin
P: Prolin
Q: Glutamin
R: Arginin
S: Serin
T: Treonin
V: Valin
W: Triptofan
Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija
[uredi | uredi izvor]Koristeći tečnu hromatografiju sa tandemskom masenom spektrometrijom, Fujita et al. (2007) identificirali su MIS18BP1 kao komponentu kompleksa MIS18 u ekstraktima HeLa ćelija. Protein MIS18BP1 sadrži Myb / SANT domenu koja može vezati DNA i ima izračunatu molekularnu masu od 129 kD. Identificirali su ortologe MIS18BP1 kod svih pregledanih kičmenjaka, ali ne i kod drugih eukariota, uključujući i S. pombe. Analiza imunofluorescencije otkrila je da je MIS18BP1 lokaliziran na centromernoj telofazi-G1 u transficiranim ćelijama HeLa.[10]
Funkcija gena
[uredi | uredi izvor]Koristeći masenu spektroskopiju, imunoprecipitaciju i 2– i 3-hibridne analize kvasca, Fujita et al. (2007) otkrili su da su ljudski MIS18-alfa, MIS18-beta i MIS18BP1 tvorili MIS18 kompleks. Analiza imunofluorescencije potvrdila je da su se sva tri proteina kolokalizirala u centromerama u HeLa ćelija, ovisano o ciklusu. Kolokalizacija se dogodila tokom mitotskog izlaza koji je započeo u anafazi/telofazi, a proteini su ostali povezani tokom rane G1-faze. Analiza nokdauna posredstvom RNK posredovanja u HeLa ćelijama pokazala je da je ljudski kompleks MIS18 presudan za poravnavanje metafaza i pravilnu segregaciju hromosoma. Centromerna lokalizacija tri proteina MIS18 bila je bitna za naknadno regrutovanje de novo sintetiziranog CENPA. Analiza mutacije otkrila je da je konzervirani motiv MIS18-alfa potreban za ispravnu lokalizaciju i funkciju proteina MIS18. Inhibicija histonskih deacetilaza poboljšala je regrutaciju novosintetiziranog CENPA u ćelijama osiromašenim MIS18 , oviso o dozi, pokazujući da je centromerni histon potrebno acetilirati prije taloženja CENPA na centromere. Pored toga, MIS18-alfa, MIS18-beta i MIS18BP1 međusobno su ovisili o lokalizaciji centromere. Nokdaun bilo kojeg od tri proteina MIS18 ukinuo je regrutaciju centromere novo sintetiziranog CENPA, praćeno defektima kao što su neusklađeni hromosomi, pogrešno anafazno razdvajanje i mikrofaze.
Analizom ekspresije u čelijama HeLa, Spiller et al. (2017) pokazali su da je N-terminalna regija MIS18BP1 dovoljna za direktnu interakciju s MIS18A-MIS18B da formira kompleks MIS18. Testiranje in vitro potvrdilo je da je MeDiY domen MIS18A, a ne MIS18B, direktno komunicirao sa N-terminalnom regijom MIS18BP1. Međutim, MIS18A-MIS18B MeDiY-ni heterodimer vezao je MIS18BP1 snažnije od samog MIS18A MeDiY, što ukazuje da MIS18A MeDiY ostvaruje dodatne kontakte s MIS18BP1, u prisustvu MIS18B MeDiY ili da MIS18B MeDiY jača vezivanje MIS18A MeDI1.[11]
Utvrdili da su četiri kopije MIS18A i dvijekopije MIS18B formirale heteroheksamer koji je povezao dvije kopije MIS18BP1, da bi se formirao heterooktamerni MIS18 kompleks. Heteroheksamer MIS18A-MIS18B sastavljen je od heterotrimera formiranih preko C-terminalnog alfa-heliksnih domena MIS18A i MIS18B, koji su zatim sastavljeni u heteroheksamer putem MeDiY interfejsa za dimerizaciju. Ovaj je takođe bio potreban za vezivanje dvije kopije MIS18BP1, da bi se formirao MIS18 hetero-oktamer i za taloženje CENPA na centromeri. Dva konsenzusna mjesta CDK1 fosforilacija unutar N-terminalne regije MIS18BP1 bila su direktno uključena u vezivanje MIS18A-MIS18B, što ukazuje na to da sklop MIS18 kompleksa i centromerna lokalizacija vjerovatno reguliraju CDK1 na način ovisan o [ćelijski ciklus|[ćelijskom ciklusu]].
Modelni organizmi
[uredi | uredi izvor]| Svojstvo | Fenotip |
|---|---|
| Vijabilnost homozigota | Nenormalno |
| Studija recesivne letalnosti | Nenormalno |
| Plodnost | Normalno |
| Tjelesna težina | Normalno |
| Test otvorenog polja: anksioznost | Normalno |
| Neurološka procjena | Normalno |
| Snaga stiska | Normalno |
| Test vruće ploče | Normalno |
| Dismorfologija | Nenormalno |
| Indirektna kalorimetrija | Normalno |
| Test tolerancije glukoze | Normalno |
| Slušni odgovor moždanog stabla | Normalno |
| DEXA | Normalno |
| Radiografija | Normalno |
| Tjelesna temperatura | Normalno |
| Morfologija oka | Normalno |
| Klinička hemija (nalaz) | Normalno |
| Plazmatski imunoglobulini | Normalno |
| Hematologija | Normalno |
| Leukociti periferne krvi | Normalno |
| Mikronukleus test | Normalno |
| Težina srca | Normalno |
| Histopatologija oka | Normalno |
| Salmonella infekcija | Normalno[12] |
| Citrobacter infekcija | Normal[13] |
| Svi testovi i analize su iz [14][15] |
U proučavanju PNPO funkcije, korišteni su modelni organizmi. Uvjetna linija nokaut-miševa, zvana Mis18bp1 [16][17] generirana je kao dio programa Međunarosnog konzorcija za miševe – visokopropusnog projekta mutageneze za generiranje i distribuciju životinjskih modela bolesti zainteresiranim naučnicima.[18][19][20]
Muške i ženske životinje prolazile su standardizirani fenotipski skrining, kako bi se utvrdili efekti delecije.[14][21] Od 24 izvedena testa ina mutantnim miševima, uočene su tri značajne abnormalnosti.[14] Tokom gestacije, nije utvrđen homozigotni mutantni embrion, pa tako nijedan nije preživio do odvikavanja. Preostali testovi su izvedeni na mutiranim heterozigotnim odraslim miševima; nisu opažene nikakve dodatne značajne abnormalnosti kod ovih životinja.[14]
Reference
[uredi | uredi izvor]- ^ a b c GRCh38: Ensembl release 89: ENSG00000129534 - Ensembl, maj 2017
- ^ a b c GRCm38: Ensembl release 89: ENSMUSG00000047534 - Ensembl, maj 2017
- ^ "Human PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ "Mouse PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ a b "MIS18 binding protein 1". Pristupljeno 4. 12. 2011.
- ^ Maddox PS, Hyndman F, Monen J, Oegema K, Desai A (Mar 2007). "Functional genomics identifies a Myb domain-containing protein family required for assembly of CENP-A chromatin". J Cell Biol. 176 (6): 757–63. doi:10.1083/jcb.200701065. PMC 2064049. PMID 17339379.
- ^ Fujita Y, Hayashi T, Kiyomitsu T, Toyoda Y, Kokubu A, Obuse C, Yanagida M (Jan 2007). "Priming of centromere for CENP-A recruitment by human hMis18alpha, hMis18beta, and M18BP1". Dev Cell. 12 (1): 17–30. doi:10.1016/j.devcel.2006.11.002. PMID 17199038.
- ^ Gross, M. B. Personal Communication. Baltimore, Md. 10/22018.
- ^ "UniProt, Q6P0N0". Pristupljeno 27. 7. 2021.
- ^ Fujita, Y., Hayashi, T., Kiyomitsu, T., Toyoda, Y., Kokubu, A., Obuse, C., Yanagida, M. Priming of centromere for CENP-A recruitment by human hMi18-alpha, hMis18-beta, and M18BP1. Dev. Cell 12: 17-30, 2007. PubMed: 17199038
- ^ Spiller, F., Medina-Pritchard, B., Abad, M. A., Wear, M. A., Molina, O., Earnshaw, W. C., Jeyaprakash, A. A. Molecular basis for Cdk1-regulated timing of Mis18 complex assembly and CENP-A deposition. EMBO Rep. 18: 894-905, 2017. PubMed: 28377371
- ^ "Salmonella infection data for Pnpo". Wellcome Trust Sanger Institute.
- ^ "Citrobacter infection data for Pnpo". Wellcome Trust Sanger Institute.
- ^ a b c d Gerdin AK (2010). "The Sanger Mouse Genetics Programme: High throughput characterisation of knockout mice". Acta Ophthalmologica. 88: 925–7. doi:10.1111/j.1755-3768.2010.4142.x. S2CID 85911512.
- ^ Mouse Resources Portal, Wellcome Trust Sanger Institute.
- ^ "International Knockout Mouse Consortium". Arhivirano s originala, 3. 4. 2012. Pristupljeno 27. 7. 2021.
- ^ "Mouse Genome Informatics".
- ^ Skarnes, W. C.; Rosen, B.; West, A. P.; Koutsourakis, M.; Bushell, W.; Iyer, V.; Mujica, A. O.; Thomas, M.; Harrow, J.; Cox, T.; Jackson, D.; Severin, J.; Biggs, P.; Fu, J.; Nefedov, M.; De Jong, P. J.; Stewart, A. F.; Bradley, A. (2011). "A conditional knockout resource for the genome-wide study of mouse gene function". Nature. 474 (7351): 337–342. doi:10.1038/nature10163. PMC 3572410. PMID 21677750.
- ^ Dolgin E (2011). "Mouse library set to be knockout". Nature. 474 (7351): 262–3. doi:10.1038/474262a. PMID 21677718.
- ^ Collins FS, Rossant J, Wurst W (2007). "A Mouse for All Reasons". Cell. 128 (1): 9–13. doi:10.1016/j.cell.2006.12.018. PMID 17218247. S2CID 18872015.
- ^ van der Weyden L, White JK, Adams DJ, Logan DW (2011). "The mouse genetics toolkit: revealing function and mechanism". Genome Biol. 12 (6): 224. doi:10.1186/gb-2011-12-6-224. PMC 3218837. PMID 21722353.
Dopunska literatura
[uredi | uredi izvor]- Fujita Y, Hayashi T, Kiyomitsu T, Toyoda Y, Kokubu A, Obuse C, Yanagida M (januar 2007). "Priming of centromere for CENP-A recruitment by human hMis18alpha, hMis18beta, and M18BP1". Dev. Cell. 12 (1): 17–30. doi:10.1016/j.devcel.2006.11.002. PMID 17199038.
- Maddox PS, Hyndman F, Monen J, Oegema K, Desai A (mart 2007). "Functional genomics identifies a Myb domain-containing protein family required for assembly of CENP-A chromatin". J. Cell Biol. 176 (6): 757–63. doi:10.1083/jcb.200701065. PMC 2064049. PMID 17339379.
- Nousiainen M, Silljé HH, Sauer G, Nigg EA, Körner R (april 2006). "Phosphoproteome analysis of the human mitotic spindle". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103 (14): 5391–6. Bibcode:2006PNAS..103.5391N. doi:10.1073/pnas.0507066103. PMC 1459365. PMID 16565220.