限制酶

黏狀末端。圖為EcoRI的切位。
平滑末端。圖為SmaI的切位。

限制酶(英語:restriction enzyme)又稱限制內切酶限制性內切酶,全稱限制性內切核酸酶[1],是一種能將雙股DNA切開的。它的切割方法是將醣類分子與磷酸之間的鍵結切斷,進而於兩條DNA鏈上各產生一個切口,且不破壞核苷酸鹼基。切割形式有兩種,分別是可產生具有突出單股DNA的黏狀末端,以及末端平整無凸起的平滑末端。[2]由於斷開的DNA片段可由另一種稱為DNA連接酶的酶黏合,因此染色體或DNA上不同的限制片段,得以經由剪接作用而結合在一起。

限制酶在分子生物學遺傳工程領域有廣泛的應用,此類酶最早發現於某些品系的大腸桿菌體內,這些品系能夠「限制」噬菌體對其感染,因此得名。科學家認為限制酶是細菌所演化出來對抗病毒感染,並幫助將已殖入的病毒序列移除的機制。是限制修飾系統的一部分。約翰霍普金斯大學丹尼爾·那森斯漢彌爾頓·史密斯伯克利加州大學沃納·亞伯因為限制酶的發現及研究,而共同獲得1978年的諾貝爾生理學或醫學獎。此酶最早的應用之一,是用來將胰島素基因轉殖到大腸桿菌,使其具備生產人類胰島素的能力。

命名

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限制酶的命名是根據細菌種類而定,以EcoRI為例:

E Escherichia (屬)
co coli (種)
R RY13 (品系)
I 首先發現 在此類細菌中發現的順序

類型

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根據限制酶的結構,輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。

第一型限制酶

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同時具有修飾及限制性切割的作用;另有识别DNA上特定鹼基序列的能力,通常其切割位距離识别位点可達數千個鹼基之遠,并不能准确定位切割位点,所以并不常用。例如:EcoB、EcoK。

第二型限制酶

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只具有限制性切割的作用,修飾作用由其他酶進行。所识别的位置多為短的迴文序列;所剪切的鹼基序列通常即為所识别的序列。是遺傳工程上,實用性較高的限制酶種類。例如:EcoRI、HindIII。

第三型限制酶

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與第一型限制酶類似,同時具有修飾及识别切割的作用。可识别短的不對稱序列,切割位與识别序列約距24-26個鹼基對,并不能准确定位切割位点,所以并不常用。例如:EcoPI、HinfIII。

例子

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名称 來源 识别序列 切割位点
EcoRI Escherichia coli
5'GAATTC 3'CTTAAG 
5'---G     AATTC---3' 3'---CTTAA     G---5' 
BamHI Bacillus amyloliquefaciens
5'GGATCC 3'CCTAGG 
5'---G     GATCC---3' 3'---CCTAG     G---5' 
HindIII Haemophilus influenzae
5'AAGCTT 3'TTCGAA 
5'---A     AGCTT---3' 3'---TTCGA     A---5' 
TaqI Thermus aquaticus
5'TCGA 3'AGCT 
5'---T   CGA---3' 3'---AGC   T---5' 
NotI Nocardia otitidis
5'GCGGCCGC 3'CGCCGGCG 
5'---GC   GGCCGC---3' 3'---CGCCGG   CG---5' 
HinfI Haemophilus influenzae
5'GANTC 3'CTNAG 
5'---G   ANTC---3' 3'---CTNA   G---5' 
Sau3A Staphylococcus aureus
5'GATC 3'CTAG 
5'---     GATC---3' 3'---CTAG     ---3' 
PovII* Proteus vulgaris
5'CAGCTG 3'GTCGAC 
5'---CAG  CTG---3' 3'---GTC  GAC---5' 
SmaI* Serratia marcescens
5'CCCGGG 3'GGGCCC 
5'---CCC  GGG---3' 3'---GGG  CCC---5' 
HaeIII* Haemophilus egytius
5'GGCC 3'CCGG 
5'---GG  CC---3' 3'---CC  GG---5' 
AluI* Arthrobacter luteus
5'AGCT 3'TCGA 
5'---AG  CT---3' 3'---TC  GA---5' 
EcoRV* Escherichia coli
5'GATATC 3'CTATAG 
5'---GAT  ATC---3' 3'---CTA  TAG---5' 
KpnI[3] Klebsiella pneumonia
5'GGTACC 3'CCATGG 
5'---GGTAC  C---3' 3'---C  CATGG---5' 
PstI[3] Providencia stuartii
5'CTGCAG 3'GACGTC 
5'---CTGCA  G---3' 3'---G  ACGTC---5' 
SacI[3] Streptomyces achromogenes
5'GAGCTC 3'CTCGAG 
5'---GAGCT  C---3' 3'---C  TCGAG---5' 
SalI[3] Streptomyces albue
5'GTCGAC 3'CAGCTG 
5'---G  TCGAC---3' 3'---CAGCT  G---5' 
SphI[3] Streptomyces phaeochromogenes
5'GCATGC 3'CGTACG 
5'---G  CATGC---3' 3'---CGTAC  G---5' 
XbaI[3] Xanthomonas badrii
5'TCTAGA 3'AGATCT 
5'---T  CTAGA---3' 3'---AGATC  T---5' 
* = 平滑末端(blunt ends)

參考文獻

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  1. ^ 高中生物学》选择性必修 3 - 生物技术与工程,人民教育出版社
  2. ^ 存档副本. [2007-07-10]. (原始内容存档于2007-04-12). 
  3. ^ 3.0 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 Molecular cell biology. Lodish, Harvey F. 5. ed. : - New York : W. H. Freeman and Co., 2003, 973 s. b ill. ISBN 0-7167-4366-3

外部連結

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